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              慢病毒包装

              相关知识:

              在有关转染的研究中,为了感染原代细胞和难感染的细胞系,研究者借助于病毒载体实现。由于慢病毒可以同时感染分裂和非分裂细胞、整合性以及免疫原性低等优点,目前在RNAi的研究中,基于慢病毒构建的shRNA被最广泛的使用。而在RNAi研究需要长期观察或者需要进行动物实验时,基于慢病毒构建的shRNA的优势更为明显。

              服务内容:

              实验流程:

              1)根据目的基因相关信息(序列,序列号等),对每条目的设计3条siRNA序列,其中一条序列为阴性对照组;

              2)根据设计好的siRNA序列,设计,合成两条互补的短片段的DNA;

              3)对合成好的DNA片段进行稀释,退火,连接到线形化处理过的载体,转化,涂平板,过夜培养;

              4)通过 PCR的方法筛选阳性菌落,进行测序,分析测序结果;

              5)对于测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量的不含内毒素的 siRNA病毒穿梭质粒;

              6)利用构建好的质粒做转染实验,48小时后通过实时荧光定量和Western的方法分析目的基因,筛选出一条最有效的siRNA序列;

              7)筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞,进行病毒包装和生产,收集病毒液;

                 8)浓缩、纯化病毒液,测定滴度。

              慢病毒包装流程

              您只需提供:

              靶基因信息。

              我们提供:

              慢病毒包装实验报告单,提供1*108TU/ml病毒(1 ml),对照病毒(200 μl)等。

              应用范畴:

              • 基因
              • 细胞
              • 微生物
              • 药物

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